Focal adhesion proteins, vinculin and integrin ß5, during early pregnancy in rat uterine epithelial cells: anastrozole favors their normal distribution / Proteínas de adhesión focales, vinculina e integrina ß5, durante el embarazo temprano en células epiteliales uterinas de rata: anastrozol favorece su distribución normal

SUMMARY: An alternative superovulator to replace clomiphene citrate is needed as clomiphene citrate is associated with low pregnancy rates. Anastrozole is an effective superovulator, but it has not been well researched. In order to determine the effectiveness of anastrozole as a superovulator and to compare it with clomiphene citrate in similar situations, this study ascertained the effects of these drugs on the expression of the focal adhesion proteins, vinculin and integrin β5, which are uterine receptivity markers, in the uterine epithelial cells of day 1 and day 6 pregnant Wistar rats. The results show that vinculin and integrin β5 are co-localized at the base of the uterine epithelium at day 1 of pregnancy whereas at day 6, they disassemble from the basal focal adhesions and co-localize and significantly increase their expression apically (p≤0.0001). Moreover, there is a significant difference in the protein expression levels of vinculin and integrin b5 in uterine luminal epithelial cells between untreated (control) and chlomiphene citrate treated rats (p≤0.0001), anastrozole and chlomiphene citrate treated rats at day 6 (p≤0.0001) suggesting the interpretation that anastrozole seems to enhance their expression in order to perhaps assist in the implantation process of the blastocyst. The immunofluorescence experiments agree with the vinculin and integrin β5 gene expression findings in which at day 6 of pregnancy, vinculin and integrin β5 gene expression are significantly upregulated in uterine luminal epithelial cells in the anastrozole treated group relative to the calibrator sample (p≤0.0001). These findings suggest that anastrozole is implantation friendly.

RESUMEN: Es necesario un superovulador alternativo para reemplazar el citrato de clomifeno, debido a que está asociado con bajas tasas de preñez. El anastrozol es un superovulador eficaz, sin embargo es poca su investigación. Con el fin de determinar la efectividad del anastrozol como superovulador y compararlo con citrato de clomifeno en situaciones similares, se determinaron los efectos de estos fármacos sobre la expresión de las proteínas de adhesión focal, vinculina e integrina β5, en marcadores de receptividad uterina en días 1 y 6, en las células epiteliales uterinas de ratas Wistar preñadas. Los resultados muestran que la vinculina y la integrina β5 se co-localizan en la base del epitelio uterino al día 1 de la gravidez mientras que al día 6 se desmontan de las adherencias focales basales, co-localizan y aumentan significativamente su expresión apicalmente (p≤0.0001). Además, existe una diferencia significativa en los niveles de expresión de proteína de vinculina e integrina β5 en células epiteliales luminales uterinas entre ratas no tratadas (control) y tratadas con citrato declomifeno (p≤0.0001), ratas tratadas con anastrozol y citrato declomifeno al día 6 (p≤0,0001) sugiriendo la interpretación de que el anastrozol parece mejorar su expresión con el fin de ayudar en el proceso de implantación del blastocisto. Los experimentos de inmunofluorescencia coinciden con los resultados de la expresión de los genes vinculina e integrina β5 en los cuales al día 6 de la preñez, la vinculina y la integrina β5 están significativamente reguladas en células epiteliales luminales uterinas en el grupo tratado con anastrozol con respecto a la muestra del calibrador (p<0,0001). Estos hallazgos sugieren que el anastrozol es favorable para la implantación.

Efecto in vivo del diclofenaco potásico sobre la expresión de selectina-L por leucocitos polimorfonucleares / In vivo effect of diclofenac potasium on the expression of L-selectina by human normal polymorphonuclear leukocytes

La selectina-L (CD62L) juegan un papel importante en la interacción inicial leucocito-endotelio, fenómeno clave en la extravasación de células del torrente sanguíneo hacia focos inflamatorios. Recientemente se ha demostrado que ciertos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) inducen in vitro una disminución en la expresión de CD62L e inhiben la interacción de leucocitos polimorfonucleares (PMN) y células endoteliales. En el presente trabajo exploramos in vivo el efecto de diclofenaco potásico sobre expresión de CD62L por PMN. Encontramos que el diclofenaco K, a la dosis que se admistra usualmente, induce una disminución rápida y significativa en la expresión de selectina-L por PMNs de sangre periférica de individuos sanos. Este efecto tendió a desaparecer 24 horas después de la suspensión del AINE. No se observó un incremento significativo en la concentración de CD62L soluble en suero a las 48 horas del inicio de la administración de diclofenaco K. Nuestros datos indican que el efecto in vitro del diclofenaco K sobre la expresión de selectina-L por leucocitos PMN ocurre también in vivo; además, y apoyan fuertemente la hipótesis de que el diclofenaco K ejerce su efecto antiinflamatorio, al menos parcialmente, a través de inducir una disminución en el expresión de CD62L por PMN. Es necesario llevar a cabo mediciones seriadas de CD62L soluble para corroborar si efectivamente la administración de diclofenaco K no afecta los niveles sérico de esta molécula

Organizaçäo do citoesqueleto e distribuiçäo da integrina 'ALFA' Ýb ß3 em plaquetas estimuladas por trombina: aplicaçöes no estudo de pacientes portadores de hipertensäo arterial pulmonar / Organization of cytoskeleton and distribution of integrin 'ALFA' Ýb ß3 in the study of pulmonary hypertensive patients

Os mecanismos envolvidos na ativaçäo e agregaçäo plaquetária em condiçöes fisiológicas e patológicas, têm sido amplamente investigados. O propósito deste estudo foi: 1. Estabelecer alguns métodos para análise da organizaçäo de elementos contráteis e distribuiçäo da integrina 'ALFA' Ýb ß3 em plaquetas normais estimuladas por trombina. Os experimentos foram realizados utilizando-se lisado total e preparaçöes de citoesqueleto e membrana plaquetária. Em todos os ensaios, a integrina foi identificada por "Western immunoblotting" com anticorpo anti-cadeia ß3; 2. O mesmo protocolo foi empregado para analisar os resultados em pacientes portadores de hipertensäo pulmonar, nas quais ativaçäo e agregaçäo de plaquetas ocorrem in vivo como já demonstrado; 3. Finalmente, os efeitos do ácido acetilsalicílico na organizaçäo do citoesqueleto e na retençäo da integrina 'ALFA' Ýb ß3 foram estudados em plaquetas normais utilizando-se a mesma metodologia...